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韩瑾 在国家创新型项目执行的一年多时间中，在 在过去的一年中，我掌握了果蝇卵巢的解剖和固定技术，学会了免疫荧光染色技术，学会了使用荧光显微镜，并且能够独立设计果蝇杂交的过程，同时，我还提高了文献检索能力和数据分析能力。 在实际的操作过程中，我及时从失败中总结得失。比如，第一次解剖果蝇时，我就犯了错误，结果差点导致果蝇全灭。后来我了解了，将果蝇用冰麻醉之前，必须将果蝇转移到没有食物的新的管子中，因为，果蝇被麻醉之后，如果试管底部有食物，果蝇会粘在试管底部，这样会损失很多果蝇。从前，解剖的时候，经常掌握不好力度，常常把果蝇的头部夹下来，弄得十分恐怖。后来，脑袋是不掉了，却把卵巢给夹坏了。摸索了一阵子，才找到了感觉。 还有很多这样那样的失误。比如，制片之前没有吹打充分，结果使得卵巢中的纤维缠绕在ovarioles，在制片的时候就不得不费很多时间去去除这些纤维。在显微镜下用镊子将egg剥离到一边后，时常与ovarioles反混，原因就是自己的动作不够熟练和迅速。用指甲油封片时，一开始也不够厚，导致样本失水。利用rabbit-antibeta-Gal抗体染色，一段时间染色效果不理想，克隆标识不够清晰。通过调整抗体的稀释倍数，做浓度梯度实验：1：500，1：1000，1：2000，最后确定1：1000的浓度稀释比，获得了较理想的染色效果。又如：Ci155染色，尝试了做浓度梯度实验，以及更改染色程序, 结果都没有见效。后来使用新的Ci155抗体，经过浓度梯度实验后染色成功。原因可能是用于稀释抗体用的山羊血清（goat-serum，GS）不够纯，在 但是，也正是通过这些失败的积累，我才慢慢地熟练起来，慢慢地了解到科研的艰辛和快乐。在进行科研的过程中，经常会遇到这样或者那样的困难，关键在于能够及时调整好心态，并且不要一味地闭门造车，遇到难题可以找老师或者前辈商量，这样往往可以达到事半功倍的效果。 此外，科研的突破常常是在一次又一次简单的重复中，逐渐积累起来的。比如。用Flp/FRT系统制作体细胞纯和突变dlgm52克隆，在卵子发育的不同阶段，热激后，可以产生不同位置的细胞克隆，热激的时间也会影响克隆的大小。因此，尝试在果蝇产卵后3.5/4.5d热激， 对我而言，科研的乐趣之一在于可以独立地设计实验和检验自己的猜测。比如，果蝇的杂交实验就有两种总体设计的思路：一种是由目标型的基因型出发，将需要引入的基因均分在母系和父系果蝇中，这步要适当考虑已有的果蝇的基因型。这个设计的思路的本质是：倒推的设计思路。因此，虽然可能获得很简单的cross过程，但是不具备cross设计的普遍性。较好的设计思路是：让果蝇的一对同源染色体或者以纯合的形式，或者以分别带有着不同的marker的形式存在，这里还要注意用balancer抑制减数分裂中的染色体交换。这是一种通法的设计，但是，存在着可能为了得到这种工具果蝇需要比第一种方法都几步cross的问题，但是，一旦这种工具果蝇完成，可以保种后反复使用，另外可以减少每次都设计cross的麻烦。因此，这两种方法各有利弊，要综合考虑，选择合适的cross设计步骤。另外，cross设计最关键的点是对于各个基因的特性要正确把握：某些有纯合致死，或者致不育的基因，设计时一定要避开纯合这种情况。还有，为了让目标型更好地在cross中传下去，通常选择雄果蝇，因为交配后产生的子代多。 当然，在科研过程中，时常会有意料之外的实验结果和现象，对于这些奇怪的现象，要做一个有心人，多问几个为什么，提出一些新假设，再做几个新的验证实验，因为，这些看似不符合我们推测的实验，可能蕴涵着新的知识。 最后一点，也是我觉得很难做到的一点，就是要勇于放弃。发觉方向错误之后，要及时地调整，要根据实验结果想原因，而不是事先想好了一套理论，企图用结果来证明。这样，往往会让自己忽略了很多事实，把结论引向错误。 有一只果蝇，它趴在玻璃窗上，巴望着窗外的美景，心里感慨着：啊，多美的景色啊。于是，它一次又一次地撞击玻璃，在最后的一击之后，它终于因为体力不支而死去了。这个故事告诉我们什么道理呢？ 有人会说：这只果蝇太傻了，总是撞玻璃，不死才怪。有人或许觉得：这只果蝇的毅力可嘉，值得称道。但是，如果这只果蝇沿着玻璃窗飞行，或许，它会在某扇玻璃窗的边缘发现一条缝隙，然后它便能飞入它所喜爱的，画一般的美景中。 我觉得，做科研亦是如此。诚然，我们需要锲而不舍地努力和孜孜不倦的追求，但是，掌握科学的方法和灵活应变的能力对于我们来说，同样重要。而此次的国家创新性实验计划，就是让我们能够在失败中积累经验，从成功中获得自信，为我们树立正确的科研观提供帮助。 【韩瑾，上海交通大学生命科学技术学院2005级生物技术专业，第一期“国家大学生创新性实验计划”——“果蝇dlg基因生殖发育生物学功能研究”项目立项人；指导教师： |
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